개요
본 발명은 고온성 균주인 더머스 칼도필러스(Thermus caldophilus) CK24로부터 유래된 새로운 내열성 DNA 중합효소에 관한 것이며 또한 유전자 재조합 대장균을 이용하여 상기 내열성 DAN 중합효소를 제조하는 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 더머스 칼도필러스 GK24로부터 새로운 내열성 DNA 중합효소를 분리하여 확인한 후 이를 코딩하는 유전자를 클로닝하여 염기 서열을 결정하고 이로부터 상기 단백질의 아미노산 서열을 결정하며 대장균내에서의 발현을 위한 최적화 조건을 구하여 상기 중합효소를 대량으로 제조 및 정제하는 방법에 관한 것이다. DNA 중합효소는 단일 가닥 DNA를 주형으로 하여 뉴클레오티드 삼인을 상보적으로 결합시켜 이중 가닥 DNA의 합성을 촉매하는 효소이다. 이러한 DNA 중합효소는 중온성 균인 대장균을 대상으로 많이 연구되어 왔으며, 이들중 DNA 중합효소 I 는DNA 염기 서열 및 전체 아미노산 서열이 결정되었고, 또한 이 DNA 중합효소 I 의 5'→3' 엑소뉴클레아제(exonuclease) 활성을 갖는 아미노 말단 영역을 제거한 클리나우 단편(Klenow fragment)은 삼차구조까지 밝혀진 바 있다(Jocye, C. M. etal., J. Biol, Chem. 257, 1958-1964(1982) ; Jocye, C. M. and Steitz, T. A., Trends Biochem. Sci. 12, 288-292(1987)). 이에 비해 고온성 균주들로부터 생성되는 내열성 DNA 중합효소에 관한 연구는 상대적으로 적었으며, 대표적인 것이 더머스 아쿠아티커스(Thermus aquaticus) YT-1의 Taq DNA 중합효소이다(Lawyer, F. C. et al., J. Bio. Chem. 264, 6427-6347(1989)). 이러한 DNA 중합효소들은 분자 생물학 분야에서 DNA의 염기 서열 결정 및 염기 치환 반응(nick-translation)등 여러 용도로 광범위하게 이용되고 있다. 특히 최근 개발된 DNA 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, 약칭 PCR)은 DNA증폭을 비롯한 각종 유전병 진단에 유용하게 활용되고 있는데, 이 기술의 특징은 55~60℃의 프라이머 어닐링, 72℃에서의DNA 중합 반응 및 94℃에서의 주형 DNA 변성등 세단계 반응과정을 약 30회 정도 반복함으로써 목적 DNA 단편을 증폭시키기 때문에 고온에서 안정한 내열성 DNA 중합효소의 사용이 필수적이다(Erlich, H. A,. PCR Technology, 1989, StocktonPress, New York). 따라서 본 발명은 기존의 Taq DNA 중합효소와의 새로운 내열성 DNA 중합효소를 찾아내고 유전공학 기술에 의한 대량 생산이 가능하게 하여 보다 저렴한 가격으로 상기 효소의 다양한 활용을 가능하게 하는 것을 목적으로 하고 있다.
상세 안내
이 기술은 생명과학 생물공정·대사공학 분야에 속하며, 세부 분류는 효소공학 (H73)입니다. 기술 개발 상태는 기술개발완료이고, 이전 여부는 미이전입니다. 희망 거래방식은 라이센스이며, 이전 조건은 협의 후 결정입니다. 기술 상세 설명은 다음과 같습니다. 본 발명은 고온성 균주인 더머스 칼도필러스(Thermus caldophilus) CK24로부터 유래된 새로운 내열성 DNA 중합효소에 관한 것이며 또한 유전자 재조합 대장균을 이용하여 상기 내열성 DAN 중합효소를 제조하는 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 더머스 칼도필러스 GK24로부터 새로운 내열성 DNA 중합효소를 분리하여 확인한 후 이를 코딩하는 유전자를 클로닝하여 염기 서열을 결정하고 이로부터 상기 단백질의 아미노산 서열을 결정하며 대장균내에서의 발현을 위한 최적화 조건을 구하여 상기 중합효소를 대량으로 제조 및 정제하는 방법에 관한 것이다. DNA 중합효소는 단일 가닥 DNA를 주형으로 하여 뉴클레오티드 삼인을 상보적으로 결합시켜 이중 가닥 DNA의 합성을 촉매하는 효소이다. 이러한 DNA 중합효소는 중온성 균인 대장균을 대상으로 많이 연구되어 왔으며, 이들중 DNA 중합효소 I 는DNA 염기 서열 및 전체 아미노산 서열이 결정되었고, 또한 이 DNA 중합효소 I 의 5'→3' 엑소뉴클레아제(exonuclease) 활성을 갖는 아미노 말단 영역을 제거한 클리나우 단편(Klenow fragment)은 삼차구조까지 밝혀진 바 있다(Jocye, C. M. etal., J. Biol, Chem. 257, 1958-1964(1982) ; Jocye, C. M. and Steitz, T. A., Trends Biochem. Sci. 12, 288-292(1987)). 이에 비해 고온성 균주들로부터 생성되는 내열성 DNA 중합효소에 관한 연구는 상대적으로 적었으며, 대표적인 것이 더머스 아쿠아티커스(Thermus aquaticus) YT-1의 Taq DNA 중합효소이다(Lawyer, F. C. et al., J. Bio. Chem. 264, 6427-6347(1989)). 이러한 DNA 중합효소들은 분자 생물학 분야에서 DNA의 염기 서열 결정 및 염기 치환 반응(nick-translation)등 여러 용도로 광범위하게 이용되고 있다. 특히 최근 개발된 DNA 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, 약칭 PCR)은 DNA증폭을 비롯한 각종 유전병 진단에 유용하게 활용되고 있는데, 이 기술의 특징은 55~60℃의 프라이머 어닐링, 72℃에서의DNA 중합 반응 및 94℃에서의 주형 DNA 변성등 세단계 반응과정을 약 30회 정도 반복함으로써 목적 DNA 단편을 증폭시키기 때문에 고온에서 안정한 내열성 DNA 중합효소의 사용이 필수적이다(Erlich, H. A,. PCR Technology, 1989, StocktonPress, New York). 따라서 본 발명은 기존의 Taq DNA 중합효소와의 새로운 내열성 DNA 중합효소를 찾아내고 유전공학 기술에 의한 대량 생산이 가능하게 하여 보다 저렴한 가격으로 상기 효소의 다양한 활용을 가능하게 하는 것을 목적으로 하고 있다.
상세 내용
기술 상세설명
본 발명은 고온성 균주인 더머스 칼도필러스(Thermus caldophilus) CK24로부터 유래된 새로운 내열성 DNA 중합효소에 관한 것이며 또한 유전자 재조합 대장균을 이용하여 상기 내열성 DAN 중합효소를 제조하는 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 더머스 칼도필러스 GK24로부터 새로운 내열성 DNA 중합효소를 분리하여 확인한 후 이를 코딩하는 유전자를 클로닝하여 염기 서열을 결정하고 이로부터 상기 단백질의 아미노산 서열을 결정하며 대장균내에서의 발현을 위한 최적화 조건을 구하여 상기 중합효소를 대량으로 제조 및 정제하는 방법에 관한 것이다. DNA 중합효소는 단일 가닥 DNA를 주형으로 하여 뉴클레오티드 삼인을 상보적으로 결합시켜 이중 가닥 DNA의 합성을 촉매하는 효소이다. 이러한 DNA 중합효소는 중온성 균인 대장균을 대상으로 많이 연구되어 왔으며, 이들중 DNA 중합효소 I 는DNA 염기 서열 및 전체 아미노산 서열이 결정되었고, 또한 이 DNA 중합효소 I 의 5'→3' 엑소뉴클레아제(exonuclease) 활성을 갖는 아미노 말단 영역을 제거한 클리나우 단편(Klenow fragment)은 삼차구조까지 밝혀진 바 있다(Jocye, C. M. etal., J. Biol, Chem. 257, 1958-1964(1982) ; Jocye, C. M. and Steitz, T. A., Trends Biochem. Sci. 12, 288-292(1987)). 이에 비해 고온성 균주들로부터 생성되는 내열성 DNA 중합효소에 관한 연구는 상대적으로 적었으며, 대표적인 것이 더머스 아쿠아티커스(Thermus aquaticus) YT-1의 Taq DNA 중합효소이다(Lawyer, F. C. et al., J. Bio. Chem. 264, 6427-6347(1989)). 이러한 DNA 중합효소들은 분자 생물학 분야에서 DNA의 염기 서열 결정 및 염기 치환 반응(nick-translation)등 여러 용도로 광범위하게 이용되고 있다. 특히 최근 개발된 DNA 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, 약칭 PCR)은 DNA증폭을 비롯한 각종 유전병 진단에 유용하게 활용되고 있는데, 이 기술의 특징은 55~60℃의 프라이머 어닐링, 72℃에서의DNA 중합 반응 및 94℃에서의 주형 DNA 변성등 세단계 반응과정을 약 30회 정도 반복함으로써 목적 DNA 단편을 증폭시키기 때문에 고온에서 안정한 내열성 DNA 중합효소의 사용이 필수적이다(Erlich, H. A,. PCR Technology, 1989, StocktonPress, New York). 따라서 본 발명은 기존의 Taq DNA 중합효소와의 새로운 내열성 DNA 중합효소를 찾아내고 유전공학 기술에 의한 대량 생산이 가능하게 하여 보다 저렴한 가격으로 상기 효소의 다양한 활용을 가능하게 하는 것을 목적으로 하고 있다.
주요 항목
기술 정보, 이렇게 활용하세요
신기술 도입이나 사업화를 검토하는 중소기업은 이 기술의 분야·이전 조건을 확인해 R&D 부담을 줄이고 기술이전 협력을 추진하는 데 활용할 수 있습니다. 기술 도입·이전·사업화를 검토하는 중소기업이 참고하는 기술 정보입니다. 보유·도입 가능 기술의 분야와 조건을 파악해 R&D·사업화 전략에 활용됩니다.
- 도입 기술은 자사 생산공정·제품과의 적합성을 먼저 검토하세요.
- 기술보증·기술이전 지원사업과 연계하면 사업화 부담을 줄일 수 있습니다.
- 특허·인증 등 권리 관계를 확인하세요.
자주 묻는 질문
기술시장 거래정보는 어떻게 활용하나요?
도입·이전 가능한 기술의 분야·조건을 파악해 R&D·사업화 전략 수립과 기술 협력처 탐색에 활용합니다.
기술 도입 시 무엇을 확인해야 하나요?
자사 생산공정·제품과의 적합성, 특허·인증 등 권리관계, 사업화 비용을 함께 검토하고 기술보증·기술이전 지원사업과 연계하세요.
데이터 출처와 신뢰도는 어떻게 되나요?
공공데이터포털(data.go.kr)의 정부·공공기관 원천 데이터를 매일 자동 갱신해 제공합니다. 세부 사항은 원문에서 확인하세요.
기술시장 거래정보 공공데이터(data.go.kr)를 기반으로 작성된 정보입니다.