개요
포유동물의 수정란에 조직특이적 발현벡터를 도입시키기 위하여 염소의 β-lactoglobulin (BLG)의 5' -조절 부위와 polyadenylation 신호 서열을 갖는 벡터로 삽입하여 제조하였다. 사람 α1-antitrypsin (α1-AT)과 erythropoietin (EPO) 유전자의 genomic 염기서열을 BLG의 5' -조절 부위 서열을 갖는 pBluescript에 각각 삽입하여 p1692g-AT와 p1692epo 벡터를 만들었다. 형질 전환된 유선 세포 HC11에서의 α1-AT 및 EPO mRNA 발현을 확인하였으며, 형질 전환된 유선 세포에서의 α1-AT 및 EPO 단백질 발현 및 분비를 면역블랏 방법으로 확인하였다. 또한 조직특이적 유용단백질 발현 효율증진을 위하여 유선 특이적 actiavtion element를 포함하는 것으로 추정되는 -470∼-740 지역을 Gel-shift 및 Foot-printing 방법으로 분석하여 actiavtion element로 추정되는 -697∼-744 부위를 올리고뉴클레오타이드로 합성하였다. 이 올리고뉴클레오타이드는 BLG의 205 프로모터의 상류에 세벌로 결합되었을 때 205 프로모터를 크게 활성화 시켰을뿐만 아니라, 이 oligonucleotide는 젖 생산 호르몬들을 처리 했을 때 프로모터 활성을 약 6배 정도 증가 시켰다. 이상과 같은 유선 특이적 actiavtion element는 유선 조직-특이적 고활성 프로모터의 제작에 이용될 수 있을 것이다. 이상과 같이 제조된 사람 α1-antitrypsin 과 EPO 유전자 발현용 재조합 DNA를 생쥐 수정란에 미세주사하여 유전자이식 생쥐를 만든 결과 여러 마리의 founder mice를 만드는데 성공하였고, 이 founder mice를 다시 교배시켜 외부 유전자의 삽입이 확인된 유전자이식생쥐 Line을 얻었다. 특별히 EPO 발현 유전자이식생쥐의 line들을 분석한 결과 유전자이식생쥐에서 EPO가 혈액으로 다량을 분비되는 polycythemia와 유사한 phenotype이 발견되었다. 지금까지 얻은 결과들로 미루어 보아 염소의 BLG promoter가 생쥐의 생체내에서 확실히 발현된다는 것을 알 수 있었고, 유전자이식생쥐의 polycythemic phenotype에 의한 교배의 어려움으로 인해 유즙생산을 위해 비교적 오랜 시간이 필요할 것으로 예상되나, 궁극적으로 조직특이적 발현의 개선과 함께 성공적인 유전자이식생쥐의 개발과 유즙 내에서의 EPO 대량생산이 가능하라리 기대된다. 현재 얻은 EPO 유전자이식생쥐는 세계에서 처음으로 개발된 것으로서 유용단백질 생산의 차원을 떠나 polycythemia의 질병모델로도 그 가치가 높이 평가되고 있다.적혈구수, hematocrit, 혈액중 EPO 농도, 거대비장증(splenomegaly) 등 여러 가지가 인간의 polycythemia와 극히 유사하여, 이 질병의 기전연구와 치료를 위한 중요한 실험동물로 쓰일 수 있다
상세 안내
이 기술은 생명과학 생물자원 보존·생산·이용 기술 분야에 속하며, 세부 분류는 동물자원입니다. 기술 개발 상태는 기술개발완료이고, 이전 여부는 미이전입니다. 희망 거래방식은 라이센스이며, 이전 조건은 협의 후 결정입니다. 기술 상세 설명은 다음과 같습니다. 포유동물의 수정란에 조직특이적 발현벡터를 도입시키기 위하여 염소의 β-lactoglobulin (BLG)의 5' -조절 부위와 polyadenylation 신호 서열을 갖는 벡터로 삽입하여 제조하였다. 사람 α1-antitrypsin (α1-AT)과 erythropoietin (EPO) 유전자의 genomic 염기서열을 BLG의 5' -조절 부위 서열을 갖는 pBluescript에 각각 삽입하여 p1692g-AT와 p1692epo 벡터를 만들었다. 형질 전환된 유선 세포 HC11에서의 α1-AT 및 EPO mRNA 발현을 확인하였으며, 형질 전환된 유선 세포에서의 α1-AT 및 EPO 단백질 발현 및 분비를 면역블랏 방법으로 확인하였다. 또한 조직특이적 유용단백질 발현 효율증진을 위하여 유선 특이적 actiavtion element를 포함하는 것으로 추정되는 -470∼-740 지역을 Gel-shift 및 Foot-printing 방법으로 분석하여 actiavtion element로 추정되는 -697∼-744 부위를 올리고뉴클레오타이드로 합성하였다. 이 올리고뉴클레오타이드는 BLG의 205 프로모터의 상류에 세벌로 결합되었을 때 205 프로모터를 크게 활성화 시켰을뿐만 아니라, 이 oligonucleotide는 젖 생산 호르몬들을 처리 했을 때 프로모터 활성을 약 6배 정도 증가 시켰다. 이상과 같은 유선 특이적 actiavtion element는 유선 조직-특이적 고활성 프로모터의 제작에 이용될 수 있을 것이다. 이상과 같이 제조된 사람 α1-antitrypsin 과 EPO 유전자 발현용 재조합 DNA를 생쥐 수정란에 미세주사하여 유전자이식 생쥐를 만든 결과 여러 마리의 founder mice를 만드는데 성공하였고, 이 founder mice를 다시 교배시켜 외부 유전자의 삽입이 확인된 유전자이식생쥐 Line을 얻었다. 특별히 EPO 발현 유전자이식생쥐의 line들을 분석한 결과 유전자이식생쥐에서 EPO가 혈액으로 다량을 분비되는 polycythemia와 유사한 phenotype이 발견되었다. 지금까지 얻은 결과들로 미루어 보아 염소의 BLG promoter가 생쥐의 생체내에서 확실히 발현된다는 것을 알 수 있었고, 유전자이식생쥐의 polycythemic phenotype에 의한 교배의 어려움으로 인해 유즙생산을 위해 비교적 오랜 시간이 필요할 것으로 예상되나, 궁극적으로 조직특이적 발현의 개선과 함께 성공적인 유전자이식생쥐의 개발과 유즙 내에서의 EPO 대량생산이 가능하라리 기대된다. 현재 얻은 EPO 유전자이식생쥐는 세계에서 처음으로 개발된 것으로서 유용단백질 생산의 차원을 떠나 polycythemia의 질병모델로도 그 가치가 높이 평가되고 있다.적혈구수, hematocrit, 혈액중 EPO 농도, 거대비장증(splenomegaly) 등 여러 가지가 인간의 polycythemia와 극히 유사하여, 이 질병의 기전연구와 치료를 위한 중요한 실험동물로 쓰일 수 있다
상세 내용
기술 상세설명
포유동물의 수정란에 조직특이적 발현벡터를 도입시키기 위하여 염소의 β-lactoglobulin (BLG)의 5' -조절 부위와 polyadenylation 신호 서열을 갖는 벡터로 삽입하여 제조하였다. 사람 α1-antitrypsin (α1-AT)과 erythropoietin (EPO) 유전자의 genomic 염기서열을 BLG의 5' -조절 부위 서열을 갖는 pBluescript에 각각 삽입하여 p1692g-AT와 p1692epo 벡터를 만들었다. 형질 전환된 유선 세포 HC11에서의 α1-AT 및 EPO mRNA 발현을 확인하였으며, 형질 전환된 유선 세포에서의 α1-AT 및 EPO 단백질 발현 및 분비를 면역블랏 방법으로 확인하였다. 또한 조직특이적 유용단백질 발현 효율증진을 위하여 유선 특이적 actiavtion element를 포함하는 것으로 추정되는 -470∼-740 지역을 Gel-shift 및 Foot-printing 방법으로 분석하여 actiavtion element로 추정되는 -697∼-744 부위를 올리고뉴클레오타이드로 합성하였다. 이 올리고뉴클레오타이드는 BLG의 205 프로모터의 상류에 세벌로 결합되었을 때 205 프로모터를 크게 활성화 시켰을뿐만 아니라, 이 oligonucleotide는 젖 생산 호르몬들을 처리 했을 때 프로모터 활성을 약 6배 정도 증가 시켰다. 이상과 같은 유선 특이적 actiavtion element는 유선 조직-특이적 고활성 프로모터의 제작에 이용될 수 있을 것이다. 이상과 같이 제조된 사람 α1-antitrypsin 과 EPO 유전자 발현용 재조합 DNA를 생쥐 수정란에 미세주사하여 유전자이식 생쥐를 만든 결과 여러 마리의 founder mice를 만드는데 성공하였고, 이 founder mice를 다시 교배시켜 외부 유전자의 삽입이 확인된 유전자이식생쥐 Line을 얻었다. 특별히 EPO 발현 유전자이식생쥐의 line들을 분석한 결과 유전자이식생쥐에서 EPO가 혈액으로 다량을 분비되는 polycythemia와 유사한 phenotype이 발견되었다. 지금까지 얻은 결과들로 미루어 보아 염소의 BLG promoter가 생쥐의 생체내에서 확실히 발현된다는 것을 알 수 있었고, 유전자이식생쥐의 polycythemic phenotype에 의한 교배의 어려움으로 인해 유즙생산을 위해 비교적 오랜 시간이 필요할 것으로 예상되나, 궁극적으로 조직특이적 발현의 개선과 함께 성공적인 유전자이식생쥐의 개발과 유즙 내에서의 EPO 대량생산이 가능하라리 기대된다. 현재 얻은 EPO 유전자이식생쥐는 세계에서 처음으로 개발된 것으로서 유용단백질 생산의 차원을 떠나 polycythemia의 질병모델로도 그 가치가 높이 평가되고 있다.적혈구수, hematocrit, 혈액중 EPO 농도, 거대비장증(splenomegaly) 등 여러 가지가 인간의 polycythemia와 극히 유사하여, 이 질병의 기전연구와 치료를 위한 중요한 실험동물로 쓰일 수 있다
주요 항목
기술 정보, 이렇게 활용하세요
신기술 도입이나 사업화를 검토하는 중소기업은 이 기술의 분야·이전 조건을 확인해 R&D 부담을 줄이고 기술이전 협력을 추진하는 데 활용할 수 있습니다. 기술 도입·이전·사업화를 검토하는 중소기업이 참고하는 기술 정보입니다. 보유·도입 가능 기술의 분야와 조건을 파악해 R&D·사업화 전략에 활용됩니다.
- 도입 기술은 자사 생산공정·제품과의 적합성을 먼저 검토하세요.
- 기술보증·기술이전 지원사업과 연계하면 사업화 부담을 줄일 수 있습니다.
- 특허·인증 등 권리 관계를 확인하세요.
자주 묻는 질문
기술시장 거래정보는 어떻게 활용하나요?
도입·이전 가능한 기술의 분야·조건을 파악해 R&D·사업화 전략 수립과 기술 협력처 탐색에 활용합니다.
기술 도입 시 무엇을 확인해야 하나요?
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데이터 출처와 신뢰도는 어떻게 되나요?
공공데이터포털(data.go.kr)의 정부·공공기관 원천 데이터를 매일 자동 갱신해 제공합니다. 세부 사항은 원문에서 확인하세요.
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