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신호전달체계 연구를 위한 세포성장인자 유전자 탐색 및 발현 (한국생산기술연구원) [000606]

신호전달체계 연구를 위한 세포성장인자 유전자 탐색 및 발현은(는) 이전·라이선스가 가능한 기술시장 거래정보입니다. 보유기업은 한국생산기술연구원입니다.

개요

1. EGF의 대량정제공정 확립 EGF 발현균주인 E. coli JM101/pTE105를 발효시켜 획득한 발효상등액으로부터 3단계 정제공정을 거쳐 1회 정제시 99.5% 이상의 순도를 가지는 EGF를 1.5g 이상 분리정제하는 공정을 확립하였으며 이 정제방법을 특허출원 하였다(대한민국 특허출원 제93-6980호). 2. 구조, 조성 및 물리화학적 특성규명 정제한 EGF의 아미노산 서열 및 조성분석, peptide mapping 및 disulfide 결합위치 분석등을 수행한 결과 천연에 존재하는 EGF와 동일한 아미노산서열 및 구조를 갖는다는 것을 규명하였으며, 또한 SDS-PAGE, Western blotting, Gel filtration FPLC, RP-HPLC등의 분석법을 적용하여 EGF의 분자량 및 면역학적 성질이 천연의 것과 동등하였고, circular dichroism 분석과 NMR의 방법으로 분석하였을 때 2차 및 3차 구조도 천연의 EGF와 동일함을 확인하였다. 3. EGF의 생물학적활성 연구 정제된 EGF의 생물학적 활성을 mitogenic assay와 receptor binding assay를 수행하여 측정한 결과 정제된 EGF 1mg은 국제활성단위(international unit)로 1.37±0.17×106 IU로 측정되었으며, in vivo 실험인 guinea pig의 피부창상에 대해서도 EGF는 유의성있는 피부재생효과를 나타내었다. 4. EGF의 안정성연구 EGF의 안정성시험을 pH 및 온도, 장기보관, 가혹보관등의 조건하에서 수행한 결과, EGF는 중성 pH(pH 5∼7)에서 안정하였으며, -20℃와 4℃에 58주 동안 장기보관시, 분말 혹은 용액상태에 관계없이 함량, 순도, 활성의 유의적인 변화를 보이지 않았다. 한편 온도가 37℃ 이상 및 freezing and thawing등의 가혹조건 하에서는 탈아미노 EGF와 같은 분해산물들이 나타났으나 이들 역시 90% 이상의 생물학적 활성을 나타내었다. 5. 피부재생제 및 각막부활용 의약품으로의 개발 본 연구결과 화상치료 및 각막손상의 근본적 치료제로서 유망한 EGF 단백질원료의 대량생산이 가능해졌으므로, 빠른 시일내 의약품으로의 제품화가 가능할 것으로 기대된다. 현재 대웅제약에서는 본 연구를 통하여 얻어진 EGF를 피부창상, 화상 및 만성피부궤양을 치료하고자 하는 피부상처치료제와 각막수술, 엑시머레이져에 의한 근시교정술시 손상되는 각막의 회복을 촉진시키는 각막상처 치료제로의 개발을 추진하고 있다.

상세 안내

이 기술은 생명과학 생물공정·대사공학 분야에 속하며, 세부 분류는 효소공학 (H73)입니다. 기술 개발 상태는 기술개발완료이고, 이전 여부는 미이전입니다. 희망 거래방식은 라이센스이며, 이전 조건은 협의 후 결정입니다. 기술 상세 설명은 다음과 같습니다. 1. EGF의 대량정제공정 확립 EGF 발현균주인 E. coli JM101/pTE105를 발효시켜 획득한 발효상등액으로부터 3단계 정제공정을 거쳐 1회 정제시 99.5% 이상의 순도를 가지는 EGF를 1.5g 이상 분리정제하는 공정을 확립하였으며 이 정제방법을 특허출원 하였다(대한민국 특허출원 제93-6980호). 2. 구조, 조성 및 물리화학적 특성규명 정제한 EGF의 아미노산 서열 및 조성분석, peptide mapping 및 disulfide 결합위치 분석등을 수행한 결과 천연에 존재하는 EGF와 동일한 아미노산서열 및 구조를 갖는다는 것을 규명하였으며, 또한 SDS-PAGE, Western blotting, Gel filtration FPLC, RP-HPLC등의 분석법을 적용하여 EGF의 분자량 및 면역학적 성질이 천연의 것과 동등하였고, circular dichroism 분석과 NMR의 방법으로 분석하였을 때 2차 및 3차 구조도 천연의 EGF와 동일함을 확인하였다. 3. EGF의 생물학적활성 연구 정제된 EGF의 생물학적 활성을 mitogenic assay와 receptor binding assay를 수행하여 측정한 결과 정제된 EGF 1mg은 국제활성단위(international unit)로 1.37±0.17×106 IU로 측정되었으며, in vivo 실험인 guinea pig의 피부창상에 대해서도 EGF는 유의성있는 피부재생효과를 나타내었다. 4. EGF의 안정성연구 EGF의 안정성시험을 pH 및 온도, 장기보관, 가혹보관등의 조건하에서 수행한 결과, EGF는 중성 pH(pH 5∼7)에서 안정하였으며, -20℃와 4℃에 58주 동안 장기보관시, 분말 혹은 용액상태에 관계없이 함량, 순도, 활성의 유의적인 변화를 보이지 않았다. 한편 온도가 37℃ 이상 및 freezing and thawing등의 가혹조건 하에서는 탈아미노 EGF와 같은 분해산물들이 나타났으나 이들 역시 90% 이상의 생물학적 활성을 나타내었다. 5. 피부재생제 및 각막부활용 의약품으로의 개발 본 연구결과 화상치료 및 각막손상의 근본적 치료제로서 유망한 EGF 단백질원료의 대량생산이 가능해졌으므로, 빠른 시일내 의약품으로의 제품화가 가능할 것으로 기대된다. 현재 대웅제약에서는 본 연구를 통하여 얻어진 EGF를 피부창상, 화상 및 만성피부궤양을 치료하고자 하는 피부상처치료제와 각막수술, 엑시머레이져에 의한 근시교정술시 손상되는 각막의 회복을 촉진시키는 각막상처 치료제로의 개발을 추진하고 있다.

상세 내용

기술 상세설명

1. EGF의 대량정제공정 확립 EGF 발현균주인 E. coli JM101/pTE105를 발효시켜 획득한 발효상등액으로부터 3단계 정제공정을 거쳐 1회 정제시 99.5% 이상의 순도를 가지는 EGF를 1.5g 이상 분리정제하는 공정을 확립하였으며 이 정제방법을 특허출원 하였다(대한민국 특허출원 제93-6980호). 2. 구조, 조성 및 물리화학적 특성규명 정제한 EGF의 아미노산 서열 및 조성분석, peptide mapping 및 disulfide 결합위치 분석등을 수행한 결과 천연에 존재하는 EGF와 동일한 아미노산서열 및 구조를 갖는다는 것을 규명하였으며, 또한 SDS-PAGE, Western blotting, Gel filtration FPLC, RP-HPLC등의 분석법을 적용하여 EGF의 분자량 및 면역학적 성질이 천연의 것과 동등하였고, circular dichroism 분석과 NMR의 방법으로 분석하였을 때 2차 및 3차 구조도 천연의 EGF와 동일함을 확인하였다. 3. EGF의 생물학적활성 연구 정제된 EGF의 생물학적 활성을 mitogenic assay와 receptor binding assay를 수행하여 측정한 결과 정제된 EGF 1mg은 국제활성단위(international unit)로 1.37±0.17×106 IU로 측정되었으며, in vivo 실험인 guinea pig의 피부창상에 대해서도 EGF는 유의성있는 피부재생효과를 나타내었다. 4. EGF의 안정성연구 EGF의 안정성시험을 pH 및 온도, 장기보관, 가혹보관등의 조건하에서 수행한 결과, EGF는 중성 pH(pH 5∼7)에서 안정하였으며, -20℃와 4℃에 58주 동안 장기보관시, 분말 혹은 용액상태에 관계없이 함량, 순도, 활성의 유의적인 변화를 보이지 않았다. 한편 온도가 37℃ 이상 및 freezing and thawing등의 가혹조건 하에서는 탈아미노 EGF와 같은 분해산물들이 나타났으나 이들 역시 90% 이상의 생물학적 활성을 나타내었다. 5. 피부재생제 및 각막부활용 의약품으로의 개발 본 연구결과 화상치료 및 각막손상의 근본적 치료제로서 유망한 EGF 단백질원료의 대량생산이 가능해졌으므로, 빠른 시일내 의약품으로의 제품화가 가능할 것으로 기대된다. 현재 대웅제약에서는 본 연구를 통하여 얻어진 EGF를 피부창상, 화상 및 만성피부궤양을 치료하고자 하는 피부상처치료제와 각막수술, 엑시머레이져에 의한 근시교정술시 손상되는 각막의 회복을 촉진시키는 각막상처 치료제로의 개발을 추진하고 있다.

주요 항목

기술명신호전달체계 연구를 위한 세포성장인자 유전자 탐색 및 발현
기술번호S2000000606
보유기업한국생산기술연구원
개발 상태기술개발완료
이전 여부미이전
기술분류생명과학 생물공정·대사공학
세부 기술분류효소공학 (H73)
세부 키워드세포성장인자, 발현균주, 발효상등액, 피부상처치료제, 각막상처치료제
거래 방식자가등록
희망 거래방식라이센스
이전 조건협의 후 결정
등록 완료일2000-04-07
rownum605
기술분류(대)생명과학
기술분류(중)생물공정·대사공학
tcntrnAmtCd0
tcntrnAmtCdNm기타

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